Apakah itu Polyacrylamide Gel Electrophoresis
Jul 29, 2024Poliakrilamida elektroforesis gel (PAGE) ialah teknik yang biasa digunakan dalam biokimia, biologi molekul, dan bioteknologi untuk mengasingkan dan menganalisis biomolekul, terutamanya protein dan asid nukleik, berdasarkan saiz dan casnya. Teknik ini melibatkan penggunaan matriks gel yang terdiri daripada polyacrylamide, bahan yang membentuk rangkaian berliang apabila dipolimerkan.
Semasa penyediaan gel, monomer akrilamida dicampur dengan agen penghubung silang, biasanya bis-akrilamida, dan pemula pempolimeran. Campuran ini kemudiannya dituangkan ke dalam dulang tuangan gel dan dibiarkan berpolimer, membentuk gel pepejal. Kepekatan akrilamida menentukan julat saiz molekul yang boleh diselesaikan, dengan kepekatan yang lebih rendah sesuai untuk molekul yang lebih besar dan kepekatan yang lebih tinggi untuk molekul yang lebih kecil.
Apabila gel telah menjadi pejal, ia diletakkan secara menegak dalam radas elektroforesis yang terdiri daripada dua elektrod yang disambungkan kepada bekalan kuasa. Gel direndam dalam larutan penimbal yang mengalirkan elektrik. Sampel yang mengandungi biomolekul yang menarik, biasanya dicampur dengan penimbal pemuatan, dimuatkan ke dalam telaga yang dibuat dalam gel.
Apabila arus elektrik digunakan, biomolekul berhijrah melalui matriks gel. Penghijrahan berlaku disebabkan oleh cas elektrik yang dibawa oleh biomolekul dan interaksinya dengan matriks gel. Molekul yang lebih kecil bergerak lebih cepat melalui liang gel, manakala molekul yang lebih besar terhalang dan berhijrah dengan lebih perlahan.
Selepas proses elektroforesis, gel boleh diwarnakan dengan pewarna tertentu atau dirawat dengan antibodi untuk memvisualisasikan dan mengesan biomolekul yang dipisahkan. Imej gel atau corak jalur yang terhasil boleh memberikan maklumat tentang saiz, bentuk, dan kelimpahan relatif molekul dalam sampel. Penyelidik sering menggunakan PAGE untuk mengenal pasti protein, menganalisis kompleks protein, menilai ketulenan protein, dan menentukan saiz serpihan asid nukleik.
TAG :